Co to jest elektroforeza żelowa 2D?

Dwuwymiarowa (2D) Elektroforeza żelowa to metoda stosowana przez naukowców do rozebrania i analizy mieszanin białkowych poprzez pierwsze oddzielenie pasm białek wzdłuż dwóch różnych osi.Jest to technika, która jest najczęściej stosowana w ramach skomplikowanych lub gęstej mieszanki białek, często z nakładającymi się rozmiarami białek.Elektroforeza żelowa 2D różni się od jednowymiarowej elektroforezy żelowej, ponieważ poprzednia metoda stosuje oddzielenie białek opartych na dwóch różnych cechach białka, podczas gdy jednowymiarowa elektroforeza żelowa zwykle oddziela białka oparte na pojedynczej charakterystyce, takiej jak wielkość białka.

Elektroforeza żelowa jest częstoUżywany w badaniach w celu oddzielenia cząsteczek poprzez wykorzystanie faktu, że wiele biologicznych cząsteczek, takich jak DNA, ma ładunek elektryczny.Fakt ten może być wykorzystany na korzyść naukowców, ponieważ naładowane cząsteczki można oddzielić wielkością przez porowate podłoże, takie jak agaroza, stosując gradient napięcia w porowatym żelu jonowym.Z czasem cząsteczki przechodzą przez ten żel, w kierunku ładunku, który jest przeciwny do naturalnego ładunku cząsteczki.Małe cząsteczki i mocno naładowane cząsteczki poruszają się szybciej niż duże cząsteczki lub białka, które są słabo naładowane.W elektroforezie żelu 2D, po oddzieleniu białek za pomocą pojedynczej charakterystyki, która tworzy gradient, żel można następnie obracać na bok, aby oddzielić te wcześniejsze pasma na podstawie drugiej charakterystyki.

2D Elektroforeza żelowa często stosuje opłaty cząsteczkowe białek jako jednegoCharakterystyka, dzięki której agregaty białkowe można podzielić na białka jednocześnie.Masa białka jest kolejną powszechną cechą stosowaną do oddzielania białek w elektroforezy żelowej 2D.Po uruchomieniu białek na żelu przez pojedynczy pas w jednowymiarowej elektroforezie żelu, żel ten można następnie obrócić w wirówce, ściągając cięższe białka szybciej niż mniejsze, mniej masywne białka.Kierunek ciągnięcia jest prostopadły do kierunku, w którym białka zostały narysowane przez żel z powodu przyciągania do ładunku elektrycznego przez gradient napięcia.

Elektroforeza ma wiele zastosowań w badaniach molekularnych, w tym oddzielenie białek na podstawie syntetyzowanych cech, takich jak białkotagowanie.Separacja białek oparta na masie charakterystycznej jest również stosowana, gdy białka są oznaczone innymi cząsteczkami.Technikę tę można stosować z tymi kompleksami białkowymi, ponieważ oznaczone białka będą łatwiej przepaść przez żel niż białka nie od nielażec.

Podczas gdy wiele żeli separacji w laboratoriach jest wykonanych z agarozy, separacja białek przez elektroforeza żelowa 2D najlepiej wykonuje się na żelach poliakryloamidowych.Tego rodzaju żele są używane w zachodnich blotach i innych testach opartych na białkach.Agaroza jest częściej stosowana do rozdziału segmentów DNA.